MCA6099GA AbD Serotec MOUSE ANTI PIG B CELL SUBSET 用戶指南

——精準識別豬B細胞亞群，助力免疫學與動物疾病模型研究

一、產(chǎn)品概述

MCA6099GA AbD Serotec MOUSE ANTI PIG B CELL SUBSET 是AbD Serotec公司（現(xiàn)隸屬于MorphoSys集團）研發(fā)的單克隆抗體，專為識別豬B細胞亞群設計。該抗體通過小鼠雜交瘤技術(shù)制備，具備高特異性、高親和力及低背景信號的特點，適用于流式細胞術(shù)（FCM）、免疫組織化學（IHC）、免疫熒光（IF）及Western Blot（WB）等實驗。

核心參數(shù)：

• 貨號：MCA6099GA

• 規(guī)格：0.1 mg/支（可滿足100次流式實驗或20次WB實驗）

• 保存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融

• 有效期：24個月（未開封）

• 應用領(lǐng)域：豬免疫學、異種移植研究、豬病模型開發(fā)等

二、技術(shù)優(yōu)勢

1. 高特異性

• 免疫原：重組豬B細胞表面抗原，確?？贵w對目標B細胞亞群的精準識別。

• 交叉反應性：經(jīng)ELISA與WB驗證，與豬B細胞特異性結(jié)合，不與T細胞、NK細胞等其他免疫細胞交叉反應。

2. 多應用兼容性

• 流式細胞術(shù)：推薦稀釋比例1:50-1:200，可檢測外周血單個核細胞（PBMC）中B細胞比例。

• 免疫組織化學：適用于石蠟切片與冷凍切片，推薦稀釋比例1:100-1:500。

• 免疫熒光：可與Alexa Fluor® 488、FITC等熒光標記物偶聯(lián)，實現(xiàn)多色熒光標記。

• Western Blot：檢測靈敏度達1 ng，適用于豬組織裂解液或細胞裂解液中的B細胞相關(guān)蛋白檢測。

3. 質(zhì)量驗證

• 純度：通過SDS-PAGE驗證，純度≥95%。

• 內(nèi)毒素含量：<0.1 EU/μg，符合無菌實驗要求。

三、操作指南

（一）實驗前準備

1. 試劑與耗材

• MCA6099GA抗體（貨號MCA6099GA）

• 熒光標記二抗（如Goat Anti-Mouse IgG Alexa Fluor® 488）

• 封閉液（5% BSA或10%山羊血清）

• 洗滌液（PBS + 0.1% Tween-20）

2. 儀器設置

• 流式細胞儀：設置FL1通道（激發(fā)波長488 nm，發(fā)射波長525 nm）。

• 共聚焦顯微鏡：選擇488 nm激光器，配備530/30 nm濾光片。

（二）實驗操作

1. 流式細胞術(shù)

• 樣本處理：收集豬PBMC，用PBS洗滌后重懸于100 μL FACS緩沖液中。

• 抗體孵育：加入1 μL MCA6099GA抗體（1:100稀釋），4℃避光孵育30分鐘。

• 洗滌：加入2 mL FACS緩沖液，300 × g離心5分鐘，重復2次。

• 二抗孵育：加入1 μL Alexa Fluor® 488標記二抗（1:500稀釋），4℃避光孵育30分鐘。

• 檢測：重懸于500 μL FACS緩沖液中，上機檢測。

2. 免疫組織化學

• 切片制備：取豬脾臟組織，經(jīng)4%多聚甲醛固定后，石蠟包埋切片（厚度5 μm）。

• 抗原修復：將切片置于檸檬酸緩沖液（pH 6.0）中，微波加熱10分鐘。

• 封閉：滴加5% BSA，37℃孵育30分鐘。

• 一抗孵育：滴加MCA6099GA抗體（1:200稀釋），4℃過夜。

• 顯色：加入HRP標記二抗，DAB顯色后蘇木素復染。

3. Western Blot

• 電泳：取豬脾臟組織裂解液（20 μg總蛋白），經(jīng)10% SDS-PAGE分離。

• 轉(zhuǎn)膜：將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜，300 mA恒流轉(zhuǎn)印90分鐘。

• 封閉：5%脫脂奶粉封閉1小時。

• 一抗孵育：MCA6099GA抗體（1:1000稀釋），4℃孵育過夜。

• 顯色：加入HRP標記二抗，ECL化學發(fā)光顯影。

（三）數(shù)據(jù)分析

1. 流式細胞術(shù)

• 使用FlowJo軟件分析B細胞比例，設置CD3?門控后統(tǒng)計B細胞陽性細胞。

2. 免疫組織化學

• 使用Image J軟件定量分析B細胞密度，計算每平方毫米內(nèi)的陽性細胞數(shù)。

3. Western Blot

• 使用Bio-Rad Image Lab軟件分析條帶灰度值，與內(nèi)參（如β-actin）比值確定蛋白表達量。

四、使用技巧與高效操作

1. 樣本保存

• 豬組織樣本建議液氮速凍后保存于-80℃，避免反復凍融。

• PBMC樣本需在采集后4小時內(nèi)處理，或保存于液氮中。

2. 抗體稀釋

• 使用抗體稀釋液（含1% BSA的PBS）進行稀釋，避免使用含NaN?的緩沖液。

• 未用完的稀釋抗體可分裝后保存于-20℃，避免反復凍融。

3. 實驗優(yōu)化

• 流式細胞術(shù)：若背景信號高，可增加FACS緩沖液中BSA濃度至5%。

• 免疫組織化學：若顯色不均，可延長抗原修復時間至15分鐘。

五、注意事項

1. 安全規(guī)范

• 操作時佩戴手套與口罩，避免抗體污染。

• 廢棄物需按生物安全等級處理。

2. 操作細節(jié)

• 移液精度：使用校準后的移液器，誤差<±1%。

• 孵育溫度：一抗與二抗孵育需在4℃或室溫下進行，避免37℃高溫導致非特異性結(jié)合。

3. 故障排除

• 無信號：檢查抗體是否失效（可通過WB檢測抗體質(zhì)量），或樣本是否正確處理。

• 高背景：增加封閉時間或降低抗體濃度。

六、用戶評價與支持

• 用戶反饋：

• “MCA6099GA抗體在豬B細胞檢測中表現(xiàn)出的特異性，背景信號極低。"

• “適用于多種實驗平臺，顯著提高了實驗效率。"