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蛋白快速染液(免脫色)科研應(yīng)用指南

更新時間:2025-04-15      點擊次數(shù):75

蛋白快速染液(免脫色)科研應(yīng)用指南


——高效、靈敏的蛋白檢測解決方案

一、產(chǎn)品原理與核心優(yōu)勢

1.1 技術(shù)原理

熒光/比色雙模式檢測:

含特殊染料(如SYPRO Ruby或Coomasie衍生物),可逆性結(jié)合蛋白的 疏水區(qū)域

線性動態(tài)范圍:0.5-50 ng/band(比傳統(tǒng)考馬斯亮藍(lán)靈敏10倍)

免脫色設(shè)計:

染色-洗滌一步完成(省去甲醇/乙酸脫色步驟)

兼容下游質(zhì)譜分析(無醛類交聯(lián)劑)

1.2 關(guān)鍵性能對比

參數(shù)免脫色染液傳統(tǒng)考馬斯亮藍(lán)銀染

檢測時間15分鐘2小時+脫色過夜4小時

靈敏度0.5 ng10 ng0.1 ng

質(zhì)譜兼容性優(yōu)秀中等

1.3 適用場景

推薦用途:

? SDS-PAGE/WB快速質(zhì)檢

? 低豐度蛋白可視化

? 高通量篩選實驗

二、標(biāo)準(zhǔn)化操作流程

2.1 染色步驟

復(fù)制

1. 電泳后凝膠處理:  

   - 去除SDS:用超純水漂洗2×5分鐘  

2. 染色:  

   - 加入染液(覆蓋凝膠),室溫?fù)u床孵育10分鐘  

3. 洗滌:  

   - 換超純水搖洗5分鐘(去除背景)  

4. 成像:  

   - 藍(lán)光激發(fā)(SYPRO Ruby)或直接可見光觀察  

2.2 注意事項

凝膠厚度:建議≤1 mm(過厚凝膠需延長染色5分鐘)

染色液回收:可重復(fù)使用3次(靈敏度下降≤20%)

三、數(shù)據(jù)解讀與優(yōu)化

3.1 結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)

陽性信號:清晰條帶(無橫向拖尾)

背景控制:凝膠非蛋白區(qū)域接近無色

3.2 常見問題排查

現(xiàn)象可能原因解決方案

條帶模糊SDS未去除延長水洗至10分鐘

背景過高染色時間過長縮短至5-7分鐘

信號弱蛋白量不足/染料失效增加上樣量/更換新染液

四、技術(shù)問答(Q&A)

Q1:能否用于Native-PAGE?

需改用 非變性專用染液(如F90100NT),避免SDS干擾

Q2:染色后能否回收蛋白?

可切膠進(jìn)行 膠內(nèi)酶解(需用50mM NH?HCO?充分洗滌)

文檔優(yōu)化建議:

插入 【染色效果對比圖】(標(biāo)記不同靈敏度)

添加 染色時間計算器 二維碼(根據(jù)凝膠厚度調(diào)整)

關(guān)鍵步驟標(biāo)注 ??警示(如"避免金屬器皿接觸")


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